Post di Jikky Kjj
Eccoci qui. Un'analisi completa dei candidati miRNA nell'mRNA di BNT162b2, codice del vaccino anti-covid19 di Pfizer.
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Sì, l'hanno chiamato Co-miRNA-Ty per un motivo. Non era solo mRNA.
L'interferenza è stata vista con Rho-signalling, WNT-signalling, metilazione dell'istone e ritmo circadiano.
Ecco il documento:
crimsonpublishers.com/aics/pdf/AICS.... (verione tradotta in italiano drive.google.com/file/d/1Z...)
Rho è coinvolto in molti percorsi tra cui Wnt-signalling, che è coinvolto nella regolazione del ciclo cellulare.
L'alterazione della regolazione del ciclo cellulare è ciò che causa il cancro.
Notate che ci sono un mucchio di prodotti genici coinvolti nella segnalazione Wnt e tra cui Groucho (AES), parte del quale è nella sequenza 3'UTR di BNT162b2.
Questi geni sono coinvolti nello sviluppo del cancro all'utero e di altri tumori.
Incasinare questi percorsi è rischioso. Può succedere di tutto o non succedere niente. Si potrebbe curare o causare un cancro.
Il punto è che, come David Wiseman ha sottolineato questa settimana, semplicemente non lo sappiamo.
La tecnologia 3'UTR di comirnaty non è stata MAI testata negli esseri umani.
Ciascuna delle interazioni nei percorsi richiede anni per essere studiata. E le terapie mRNA hanno potenzialmente una dozzina di interazioni miRNA, di cui non conosciamo l'effetto.
Ecco perché è stato Robert Malone - non David Wiseman - a sbagliare qui.
Il dottor David Wiseman ha una formazione in farmacologia. Egli pone una domanda ragionevole: Quanto è qualificata la FDA per indagare su un trasfettante biologico quando la maggior parte degli "scienziati" non sa cosa sia un 3'UTR, o cosa faccia la pseudouridina.
A Malone non piace.
Per la cronaca, questo è il documento pubblicato nel 2019 che ha mostrato perché Sahin ha scelto l'AES-mtRNR1 3'UTR (adiuvante), perché ha mostrato più assorbimento nella milza - nei topi.
Migliorare la consegna di geni terapeutici basati sull'mRNA tramite l'aumento dell'espressione di 3′ UTR identificati dallo screening della libreria cellulare
Proteina codifica mRNA è emerso come una nuova tecnologia attraente per gene delivery.1 mRNA sintetico ha la stessa struttura come molecole di mRNA naturale e caratteristiche un tappo, 5′ e 3′ UTR e un poly (A) - coda che abbraccia il gene codificato di interesse. In contrasto con il DNA, mRNA non ha bisogno di entrare nel nucleo, e, quindi, può essere espresso in cellule non in fase di divisione. mRNA non si integra nel genoma, è solo transitoriamente attivo, ed è considerato più sicuro di DNA e vettori virali.1, 2 Produzione di mRNA sintetico da trascrizione in vitro è semplice, veloce, e costo efficiente su qualsiasi scala. Di conseguenza, lo sviluppo di farmaci mRNA ha raccolto un ampio interesse, ed è stato esplorato per la consegna in vari tipi di cellule e applicazioni diverse come la vaccinazione del cancro, riprogrammazione cellulare e terapie di sostituzione delle proteine.
La consegna degli antigeni del vaccino contro il cancro nelle cellule presentanti l'antigene, che rappresenta l'applicazione pratica più avanzata dell'mRNA, è in fase avanzata di sviluppo clinico. Un approccio è quello di caricare le cellule dendritiche umane (hDC) con mRNA in coltura cellulare e trasferire adottivamente queste cellule ingegnerizzate. Un altro approccio è quello di iniettare l'mRNA nudo nei linfonodi (rivisto in Vallazza et al.3) per un efficiente assorbimento macropinocitico da parte delle hDC residenti.4, 5 Una terza opzione, che è in fase di sperimentazione clinica, utilizza formulazioni di nanoparticelle somministrate per via endovenosa che puntano l'mRNA specificamente negli organi linfoidi per l'espressione dell'antigene in tutto il corpo da parte delle cellule presentanti l'antigene.6 Indipendentemente dal percorso, l'obiettivo è quello di ottenere la traduzione dell'antigene tumorale consegnato dall'mRNA nel citoplasma delle cellule presentanti l'antigene (rivisto in Sahin et al.1) e la presentazione di epitopi immunogenici alle cellule T nel contesto dei complessi maggiori di istocompatibilità (MHC) e delle molecole costimolatorie. La potenza della risposta immunitaria antigene-specifica è correlata positivamente alla persistenza dell'mRNA sintetico nelle hDC e alla quantità di proteina tradotta.7, 8
La medicina rigenerativa è un altro campo in cui l'mRNA viene usato per la conversione del destino cellulare, compresa la generazione di cellule staminali pluripotenti indotte (iPSC) da cellule somatiche adulte facilmente accessibili (riviste in Steinle et al.9 ). Le iPSC assomigliano alle cellule staminali embrionali umane (hESC), ma non sono associate alle rispettive preoccupazioni etiche.10 La riprogrammazione di cellule somatiche in iPSC richiede l'espressione efficiente e transitoria di fattori di trascrizione esogeni associati alla pluripotenza fino alla completa attivazione della rete endogena di mantenimento della pluripotenza della cellula.11 Per la traduzione clinica dell'approccio iPSC, il trasferimento genico di mRNA sembra più attraente della consegna retrovirale convenzionale dei fattori di trascrizione, in quanto non presenta il rischio di integrazione genomica e di riattivazione trascrizionale oncogena nelle cellule differenziate derivate da iPSC.12, 13 Abbiamo recentemente riportato un protocollo di riprogrammazione con una miscela di mRNA. Questi mRNA codificano i fattori di trascrizione iPSC-promotori stabiliti OCT4, SOX2, KLF4, cMYC, NANOG e LIN28 (OSKMNL) e le proteine di evasione immunitaria del virus della vaccinia E3, K3 e B18R (EKB).14, 15, 16
Quest'ultimo set di geni contrasta i meccanismi di difesa cellulare interferone-dipendenti di tipo I attivati dalla consegna di mRNA, che inibiscono la traduzione di mRNA e possono compromettere la vitalità cellulare su trasfezione ripetitiva.17, 18 La trasfezione di queste due classi di fattori insieme a microRNA a doppio filamento che favoriscono la riprogrammazione (miRNA) dal cluster 302/36719, 20 per 4 giorni consecutivi ha dimostrato di migliorare l'efficienza e la velocità di generazione di linee iPSC stabili da fibroblasti umani neonatali e adulti e di permettere, per la prima volta, la generazione di iPSC da cellule progenitrici endoteliali (EPC) umane derivate dal sangue.17
Indipendentemente dall'applicazione, la biodisponibilità della proteina codificata dall'mRNA è cruciale, e il suo miglioramento è continuamente esplorato con una varietà di approcci.3 Uno dei regolatori chiave della cinetica intracellulare di una molecola di mRNA è il 3′ UTR (rivisto in Guhaniyogi e Brewer21). La lunghezza della 3′ UTR ha un requisito di lunghezza ottimale, in quanto gli mRNA con 3′ UTR più lunghi hanno un'emivita più breve22 mentre gli mRNA con 3′ UTR più corti sono tradotti in modo meno efficiente.23 Le 3′ UTR comunemente utilizzate nella terapia dell'mRNA sono derivate dalle α- e β-globine,24, 25 le proteine più abbondanti degli eritrociti, che in quanto cellule enucleate non hanno una sintesi attiva dell'mRNA.26 Dopo essere stato originariamente convalidato dalla loro capacità di conferire una maggiore emivita dell'mRNA in cellule coltivate eritroleucemiche Friend27 e reticolociti umani,28 globina 3′ UTR sono ora ampiamente utilizzati per la consegna di mRNA in vari tipi di cellule.
Lo scopo di questo studio è stato quello di scoprire 3′ UTR naturali che aumentano l'espressione totale delle proteine codificate aumentando la stabilità dell'mRNA e sono paragonabili o superiori alla β-globina umana ampiamente utilizzato (hBg) 3′ UTR. A tal fine, abbiamo adattato l'evoluzione sistematica dei ligandi da arricchimento esponenziale (SELEX) 29, 30 per sviluppare un processo di selezione versatile basato sulla cultura cellulare. Il 3′ UTR scoperto da questo approccio migliorare il trasferimento di gene terapeutico basato su mRNA per varie applicazioni.
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